تأثير أضافة الالكتوفيرين الى مخفف السائل المنوي لمكباش العواسية في التموث الجرثومي

Transcript

1 تأثير أضافة الالكتوفيرين الى مخفف السائل المنوي لمكباش العواسية في التموث 1461 زينب عادل مهدي * باحث عبد الكريم عبد الرضا هوبي أستاذ قسم االنتاج الحيواني كمية الز ارعة جامعة بغداد zinabalmoosawe@yahoo.com المستخمص أجريت هذه الدراسة بهدف لمعرفة تأثير اضافة بروتين الالكتوفيرين لمخففات السائل المنوي في التموث والماعز التابع لقسم االنتاج الحيواني/ كمية الز ارعة / جامعة بغداد مجمع الجادرية وذلك.أجريت هذه الد ارسة في حقل االغنام لمفترة من 21 ايمول 2015 ولغاية 24 كانون الثاني استعممت في التجربة )4( كباش عواسية بعمر) 4-2 سنوات( وبمتوسط وزن 52 كغم وتمت عمميات جمع السائل المنوي مرتين اسبوعيا باستخدام المهبل االصطناعي. قسمت معامالت التجربة الى اربع معامالت المعاممة االعتيادية ) وحدة دولية بنسمين/ 100 االولى معاممة )القياس( التي اضيف لها المضادات الحيوية مل ) و ( 100 ممغم ستربتومايسين / 100 مل ) الى مخفف السائل المنوي لممعاممة الثانية ممغم بروتين الالكتوفيرين /لتر ) الثالثة ( 000 ممغم بروتين الالكتوفيرين / لتر ) و ال اربعة )1200 ممغم بروتين الالكتوفيرين /لتر ) الى مخففات السائل المنوي. حفظت عينات السائل المنوي بعد التخفيف لمدة 5 اياموعمى درجة ح اررة 5 م أجريت الفحوص الفيزيائية لمسائل 400( المنوي والتي شممت سالمة اكروسوم النطف والفحوصات البكترولوجية والتي شممت الكشف عن االنواع ة والعدد في المعامالت االربعة. أظهرت النتائج عدم وجود تاثير معنوي في سالمة االكروسوم لنطف الكباش وذلك عند الحفظ بالتبريد لاليام المختمفة. أدت نتائج المعامالت هي التي اضيف فيها الالكتوفيرين كمضاد حيوي الى القضاء عمى اغمب انواع ا مقارنة بمعاممة القياس اذ كانت انواع الج ارثيم في المعاممة االولى Sphingomonas و Stenotrophomonas والمعاممة الثانية والثالثة Klebsiella Proteus و.Cupriavidus اما معاممة القياس فقد كانت االنواع Staphylococcus Escherichia Klebsiella Staphylococcus Salmonella Enterobacter. اوضحت نتائج الدراسة أن استخدام الالكتوفيرين كمضاد حيوي أدى الى التقميل من العدد في المعامالت مقارنة بمجموعة القياس وتفوقت المعاممة الثانية ممغم بروتين الالكتوفيرين / لتر عمى بقية المعامالت في التقميل من العدد مقارنة ببقية المعامالت التي استخدم فيها ايضا 000 الالكتوفيرين. كممات مفتاحية: الالكتوفيرين المضادات الحيوية تموث السائل المنوي. * البحث مستل من رسالة ماجستير لمباحث االول. The Iraqi Journal of Agricultural Sciences 47(6): Mahdi & Houbi EFFECT OF LACTOFERRIN ADDTION TO SEMEN OF AWASSI RAMS ON THE BACTERIAL CONTAMINATION Z.A. Mahdi A. A. Houbi Researcher Prof. Dep.of Animal Production - Coll. of Agric. Univ.of Baghdad zinabalmoosawe@yahoo.com ABSTRACT This study was conducted at the farm of Animal production College of Agriculture University of Baghdad Algaderia to know the effect of lactoferrin protein addition in the semen extender of Awassi during the period from 21 September 2015 to 24 February 2016 on Four Awasi rams aged 2-4 years and the average weight was 52 kg were used in this study. Semen collection from rams was done twice weekly by using the artificial vagina then it's were pooled and divided in to four treated groups the control (normal antibiotic Streptomycin 100 mg\100ml Penicillin IU / 100ml) second third and fourth treated groups was used a lactoferrin protein with the contamination of and 1200 mg \ L -1 respectively.after dilution the semen samples have been kept at the refrigerator (5 C) for 5 days to measure some physical properties of sperm which included the acrosome integrity and some bacteriological examination (type and number).data obtained from this experiment showed that there was no significant difference (p 0.05) in the acrosome integrity of sperm between the control and treated groups (23 and 4) which were decrease the most types of bacteria in the semen samples where as the type of bacteria in group 2 were sphingomonas and Stenotrophomonas and in groups 3 and 4 were Klebsiella Proteus Cupriavidus while there were six types of bacteria in the control group (Escherichia Klebsiella Staphylococcus Salmonella Enterobacter and Staphylococcus epidermidis ). It was concluded that the use of lactoferrin in the semen causing adecrease in the total number of bacteria in the semen. Key words : lactoferrin antibatic Bacteriospermia.. *Part of M.Sc. thesis of the first author.

2 المقدمة يتعرض السائل المنوي لمذكور لحاالت التموث بشكل كبير اذ تتميز العممية بمجموعة خطوات تختمف الواحدة عن االخرى والمتمثمة بعممية الجمع والتخفيف والتقييم والتبريد وكذلك التعبئة والتجميد وجود جودة السائل في عوامل التموث المنوي.)1( سوف ذلك و تؤدي الى التي من شأنيا التقميل من من المعموم أن عممية الجمع تتم الغالب باستخدام الميبل االصطناعي الذي يكون غير محكم االغالق وبالتالي فأن امكأنية التموث واردة وبشكل كبير كما في عمميات الجمع التي تتم في الكباش وأيضا نظافة معدات الجمع ومكأن الجمع والشخص القائم بيذه العممية ليا دور ميم جدا في التموث الحاصل عند اج ارء عممية الجمع والذي يعتبر ذات دور سمبي في جودة السائل المنوي المستخدم في عمميات التمقيح االصطناعي.)13 و 21( لذلك يجب التعامل بحذر عند اج ارء عممية جمع السائل المنوي واتباع الشروط الالزمة لمتقميل من التموث الحاصل في اثناء اج ارء ىذه العممية لمتقميل قدر االمكأن من حدوث التموث باتباع االج ارءات الصحيحة المتعمقة بيذا الجأنب والتي تبدأ من نظافة الحيوان نفسو ونظافة المنطقة حول القضيب وقص الشعر حول ىذه المنطقة الذي يعد بؤرة لمج ارثيم وغيرىا من االحياء المجيرية فضال عن نظافة معدات الجمع وتعقيميا باستم ارر )21(.(27( ان اضافة المضادات الحيوية في مخففات السائل المنوي عممت عمى السيطرة عمى المستعم ارت ا الموجودة ة والحد من عددىا ونمو Forming Units (CFU) Colony المنوي المحفوظ والتي تؤثر بصورة مباشرة عمى نوعية السائل والتي قد تكون المسبب في حدوث انتقال لمحاالت المرضية.ان خمو السائل المنوي من المموثات والمسببات المرضية او السيطرة عمييا تعتبر من الشروط الميمة والواجب توفرىا في السائل المنوي والمخفف المعد لمتمقيح االصطناعي لما ليذه العممية من اىمية في السيطرة عمى االم ارض االنتقالية بين الحيوانات واالحتفاظ بخصوبة جيدة لمسائل المنوي الحيوانية )17( وىواد ارج وىذا ماتوصي بو منظمة الصحة استخدام المضادات الحيوية مخففات السائل المنوي عند الحفظ بالتبريد اوالتجميد التموث عمى السيطرة اجل من المنوي في لمسائل ( 24 ). ان مهذ وهىب بروتين الالكتوفيرين من البروتنات الميمة التي تنتمي الى بروتينات عائمة الت ارنسفيرين الذي كان اول اكتشاف لو عام 1939 م )22(. وحدثت اول عممية تنقية ليذا البروتنين عام 1960 م من الحميب البقري والحميب البشري )11 و 13 ). وليذا البروتين وظائف ميمة في الجانب الدفاعي وأن اضافة بروتين الالكتوفيرين مضادا حيويا في مخففات السائل المنوي لمتقميل الى الحد االدنى من التموث لما لو من اىمية كبيرة في الدور المناعي ضد المسببات المرضية )7 و 10 و 6 و 14 (. لذلك فقد صممت ىذه الد ارسة لمعرفة امكانية احالل بروتين الالكتوفيرين كمضاد حيوي في مخففات السائل المنوي لمكباش العواسي كبديل لممضادات الحيوية المعتادة وتاثيره عمى حيوية النطف. المواد وط ارئق العمل جمع وتخفيف وتجميد السائل المنوي: اجريت ىذه الد ارسة في الحقل الحيواني و مختبر فسمجة تناسل الحيوان التابعين لقسم االنتاج الحيواني / كمية الز ارعة جامعة بغداد / مجمع الجادرية. لمفترة من 21 أيمول 2015 وحتى 24 كانون الثاني تم اج ارء عممية جمع السائل المنوي من 4 كباش عواسي محمية بواسطة الميبل االصطناعي وبواقع مرتين في االسبوع. ثم مزج العينات Semen( )Pooled وتخفيفو بنسبة 10:1 تم تحضير مخفف الترس حسب طريقة Salamon وMaxwell )21) قسمت معامالت التجربة الى اربع معامالت المعاممة )القياس( التي اضيف ليا المضادات الحيوية ) وحدة دولية بنسمين/ 100 مل( و) 100 ممغم ستربتومايسين / 100 مل( الى مخفف السائل المنوي لممعاممة الثانية )400 ممغم بروتين الالكتوفيرين /لتر ( الثالثة ( 800 ممغم بروتين الالكتوفيرين / لتر ) وال اربعة )1200 ممغم بروتين الالكتوفيرين /لتر ) الى مخففات السائل المنوي. صفات السائل المنوي التي تم د ارستها : فحص سالمة قمنسوة النطف: تم في ىذا االختبار التاكد من سالمة االكروسوم لمنطف وذلك باستخدام صبغة الكم از الجاىزة stain( )Giemsa حسب طريقة (12) Hancock أما طريقة التمييز فكانت من خالل تمون غطاء أرس النطفة السميم بالمون المائل لمبنفسجي بينما المتضر يبقى ابيض 1462

3 ليا والتي ىي )1 مل( اما االنابيب الست الباقية وضعت في داخميا saline( )Normal محمول الممح الفسمجي بكمية 9 مل ومن ثم اخذت بالماصة 1 مل من العينة وتوزيعيا عمى االنبوبة االولى الحاوية عمى العينة وتوزيعيا عمى االنبوبة الثانية وىكذا لبقية االنابيب الى ان نصل الى االنبوبة االخيرة ومن ثم القيام بعممية زرع بكتيري لكل انوب من انابيب االختبار السبعة عمى الوسط Nutrient agar في االطباق المعدة مسبقا وبواقع طبقين لكل انبوبة اختبار. وبعد االنتياء من ىذه العممية يتم حضن االطباق لمدة 24 ساعة وبعد انتياء فترة الحضن يتم اخ ارج االطباق ومن ثم عد المستعم ارت ة في الطبق الذي يحتوي عمى 30 الى 300 مستعمرة بكتيرية وباستخدام المعادلة الخاصة نستخرج العدد ة. النتائج والمناقشة لم يالحظ وجود تاثير معنوي )0.05 >P ) و حصول تدىور في قمنسوة النطف الكباش بتاثير اضافة الالكتوفيرين الى مخففات السائل المنوي لمكباش وعند الحفظ بالتبريد لاليام المختمفة )جدول 1(. اذ يتضح من جدول )1( أن النسبة المئوية قمنسوة النطف الكباش في اليوم االول من الحفظ كانت و % وفي اليوم الثاني و % 0.54 وفي اليوم الثالث و % وفي اليوم ال اربع و % كذلك لميوم الخامس و % لممعامالت السيطرة T3 T2 T1 عمى التوالي. أما بخصوص تاثير مدة الحفظ ( اليوم ) عمى سالمة اكروسوم النطف فقد أتضح حصول انخفاض معنوي (0.01>P) في قمنسوة النطف في اليوم الخامس من الحفظ لجميع المعامالت وكذلك لمجوعة السيطرة وان ىذا االنخفاض لم تتجاوز نسبة عن % 16 )جدول 1( اذ بمغت النسبة المئوية قمنسوة النطف لدى مجموعة السيطرة و % ولممعاممة T1 والمتضرر جزئيا يظير عميو المون االبيض في االماكن التي حصل فييا الضرر تحضير االوساط الزرعية لغرض اج ارء الفحوص ة :MacConkey Agar ىو الوسط المستخدم لز ارعة البكتريا من السائل المنوي ويحضر الوسط من اذابة ( 51.5 غم ) في لتر ماء مقطر في دورق خاص ومن ثم يتعرض لمتعقيم عمى 120 م لمدة ربع ساعة وبعدىا يصب في اطباق ابالستيكية بعد ان يبرد لدرجة ح اررة 40 م ز : Blood Agar وىو من االوساط التي في استعممت التجربة لغرض الزرع البكتيري من السائل المنوي ويحضر من اذابة )25 غم( في لتر ماء مع اضافة %5 دم وايضا يتعرض لمتعقيم في جياز التعقييم )Autoclave( وكذلك بعد وصول الوسط الى 40 م ويصب في االطباق البالستيكية أما طريقة العمل : فيتم عمل مسحة من السائل التخفيف بالماسحة القطنية )disposal swab( المنوي بعد المستخدمة لمرة واحدة ويتمف بعد االستعمال وعند االنتياء من عمل المسحة عمى الطبق يتم حضن الطبق لمدة ساعة في 24 الحاضنة وبعد انتياء 24 ساعة يظير النمو عمى الوسط في الطبق. وبعد ذلك يتم عزل المستعم ارت ة من الطبق واعادة ز ارعتيا بشكل مفرد اي كل مستعمرة عمى حدى culture( )sub بوساطة ال( ) loop لغرض الحصول عمى نوع واحد من ا معزول تماما عن االنواع االخرى اي اج ارء عممية.)isolated( بعد االنتياء من مرحمة زرع ا وعزليا تتم عممية تشخيص نوع ا بجياز Healthcare( )VITEK :2 المستخدم لتشخيص انواع ا بشكل دقيق من خالل اج ارء 64 تحميال كيميائيا عمى العينة الم ارد تشخيصيا وبذلك يعطي دقة عالية في تشخيص نوع ا. عممية اج ارء العد اطباق عدد بعد القيام : عمى البكتيريا بزرع بتري والتي تحتوي عمى وسط غذائي صمب بسبب الج ارثيم الكبير جدا يجب القيام بتخفيف تركيز العينة بطريقة متوالية وذلك لكي نصل الى تخفيف واحد عمى االقل حاوي عمى عدد من ا التي يمكن عدىا عمى الطبق. لكي نحصل عمى ضعف.) 6 10 ( اعداد قميمة يجب تخفيف العينة مميون أما طريقة العمل : سبعة تحضير تم أنابيب اختبار االولى تحتوي عمى العينة الم ارد اج ارء العد 1463

4 T T و % ولممعاممة و % ولممعاممة و % لاليام االول والثاني والثالث وال اربع والخامس عمى التوالي. وىذا مابينة الد ارسة الحالية أذ لم يالحظ اي ضرر في قمنسوة النطف في المعامالت التجريبية التي استخدم فييا الالكتوفيرين ان الحاجة لوجود مواد ليست فقط لممحافظة عمى اكتساب الطاقة لمنطف كذلك لممحافظة عمى قمنسوة النطف ومن ثم بقاء خمية النطفة الطول مدة ممكنة خالل الخزن )20(. ان بروتين الالكتوفيرين المضاف لممعامالت الثالث التجريبية اعطى حماية لقمنسوة النطف من صدمة البرد ومن ثم المحافظة عمى النطف في اثناء مدة التبريد وىذا مافسره )25(. كما تفسر ىذه النتائج بأن المواد البروتينة تعمل عمى احاطة خمية النطفة ومن ثم المحافظة عمييا الطول مدة ممكنة عند الحفظ بالتبريد )15(. اظيرت نتائج احالل بروتين الالكتوفيرين مضادا حيويا بديال عن المضادات الحيوية المستخدمة في مخففات السائل المنوي القضاء عمى اغمب انواع الموجودة في مخففات السائل السيطرة. حيث اظيرت نتائج التحميل الثالث وجود انواع مختمفة من في المعاممة االولى ا المنوي مقارنة مع معاممة الج ارثيم لممعامالت وىي كاالتي : كانت sphingomonas paucimobilis و Stenotrophomonas maltophilia والمعاممة الثانية Proteus mirabilis Klebsiella pneumonia وpauculus Cupriavidus وفي المعاملة الثالثة كانت : Proteus mirabilis Klebsiella pneumonia و.Cupriavidus pauculus اما معاممة السيطرة فكانت االنواع ة فييا كاالتي Escherichia hermannii Klebsiella pneumonia Staphylococcus aureus Staphylococcus Salmonella cholerasuis epidermidis وcloacae. Enterobacter واظيرت النتائج وجود تفوق واضح بمستوى لمعامالت التجربة الثالث معنوية )0.01>P( T2 و T1 T3. و من خالل الجدول رقم )2( كانت نتائج النسبة المئوية لالنواع ة لممعامالت التجريبة ومعاممة السيطرة كاالتي : المعاممة مهذ وهىب االولى )%14.29( 2 T1 والمعاممة الثانية 3 T2 )%21.43( والمعاممة الثالثة )%21.43( 3 T3 مقارنة مع معاممة السيطرة التي كانت )%42.86( 6 وبذلك حققت المعاممة ببروتين الالكتوفيرين افضل النتائج. كانت قيمة مربع كاي ( 2 )χ )جدول.)2 أظيرت نتائج المعاممة ببروتين الالكتوفيرين كبديال لممضادات الحيوية المستخدمة في مخففات السائل المنوي انخفاضا واضحا جدا في اعداد الج ارثيم الموجودة في مخففات السائل المنوي عند الحفظ بالتبريد وبينت النتائج حدوث انخفاض واضح في فييا ا في المعامالت الثالث التي استخدم اعداد الالكتوفيرين مقارنة مع معاممة السيطرة. ومن خالل الجدول االولى T1 )3( كانت نتائج العد في المعاممة )CUF/ml والمعاممة الثانية T2 كانت ( )CUF/ml والمعاممة الثالثة كانت ( )CUF/ml مقارنة مع معاممة السيطرة 0.67 )9.38.)CUF/ml ايضا من خالل التي كانت ) نتائج الجدول )3( اوضحت وجود تفوق معنوي )0.05>P( لممعاممة الثانية T2 عمى بقية المعامالت وبذلك حققت افضل النتائج في التقميل من اعداد الج ارثيم التي كانت )8.05 ) CUF/ml 1.15 مقارنة مع معاممة السيطرة التي كانت )11.05.)CUF/ml 0.57 ان طبيعة وديناميكية بروتين الالكتوفيرين الوظيفية وخاصيتو الدفاعية ضد المسببات المرضية والذي يعود الى خاصية ىذا البروتين في ربط الحديد واستقطابو من االحياء الدقيقة مما يؤدي الى تمف غشاء البكتريا وموتيا ) 23 (.كذلك يعد الالكتوفيرين من البروتينات المضادة لنشاط الميكروبات والبكتريا )19(. وىذا ما اظيرتة نتائج الد ارسة الحالية أذ بينت النتائج ان استخدام بروتين الالكتوفيرين كمضادا حيويا في مخففات السائل المنوي في المعامالت التجريبية فعاليتو في القضاء عمى انواع البكتريا الموجودة في مخففات السائل المنوي في معاممة السيطرة اذ ان الت اركيز المستخدمة من الالكتوفيرين في المعامالت الثالثة اسيمت بالقضاء عمى االنواع الضارة من البكتريا والتي من اىميا بكتيريا.E coli ويمكن تفسير ىذه النتائج ان الالكتوفيرين يعمل عمى تدمير المواقع الفعالة في البكتريا من خالل اليو عزل الحديد وكذلك التفاعل المباشر مع سطح الخمية ة وبالتالي القضاء عمييا 1464

5 و) مهذ وهىب ).)24 واظيرت المعاممة الثانية ( mg 23) )22()21( 800 /l الكتوفيرين( القضاء عمى انواع البكتريا السالبة لصبغة ك ارم ىذا ما بينو )24( أذ بين ان بروتين الالكتوفيرين اسيم في الحد من انتشار والتصاق البكتريا عن طريق التفاعل مع غشاء الخمية ة الخارجي ومن ثم االخالل بوظيفة الغشاء الخارجي وموت الخمية تدريجيا وىذا مااوضحتو ( نتائج المعامالت الثالثة التي استخدم فييا بروتين الالكتوفيرين كمضادا حيويا بالت اركيز الثالثة كذلك قد تفسر ىذه النتائج بأن الالكتوفيرين يعمل عمى اخ ارج طبقة phosphatidylserine الخمية )LPS التي يتكون منيا غشاء ة وبذلك يغير من نفاذية غشاء الخمية واالخالل بوظيفة الغشاء في دخول وخروج المواد عبر غشاء الخمية )24(. اظيرت الد ارسة الحالية ان استخدام الالكتوفيرين كمضادا حيويا أسيم وبشكل كبير في القضاء عمى اغمب انواع البكتريا الضارة والتي من اىميا البكتريا السالبة لصبغة ك ارم وىي ال.E coli التي تمتمك منافذ عمى انمعامهت انس طرة T1 سطحيا الخارجي لدخول وتبادل المواد الغذائية بين الخمية ة والمحيط الخارجي وبذلك يعمل الالكتوفيرين عمى التفاعل مع ىذه المنافذ وغمقيا وبالتالي االخالل بوظيفة دخول وخروج المواد عبر غشاء الخمية وبالتالي موتيا )9(. كما ان لمت اركيز المستخدمة في معامالت التجربة كان ليا تاثي ار ميما في التقميل من عدد البكتريا وىذا مابينتو النتائج الحالية لمد ارسة في التقميل قدر االمكان من العدد لممعامالت مقارنة مع معاممة السيطرة ىذا مافسره )26( كون ان الت اركيز العالية من الالكتوفيرين ليا دور كبير في القضاء عمى البكتريا والتاثير عمى فعاليتيا ومن ثم موت البكتريا. كما يعمل الالكتوفيرين عمى التفاعل الكيربائي مع سطح الخمية ة نتيجة وجود المواد المختمفة بتركيبة البروتين وبيذا سوف يحدث موت لمخاليا ومن ثم التقميل من اعدادىا )18(.وقد استنتج من الد ارسة ان اضافة الالكتوفيرين حسن من نوعية السائل المنوي لمكباش وساعد عمى القضاء عمى الج ارثيم الضارة في السائل المنوي. جدول 1. تأثير المعاممة بالالكتوفيرين والوقت بعد التخفيف في النسبة المئوية في سالمة قمنسوة النطف )المتوسط الخطأ القياسي( االول انثان b b ان ىو بعذ انجمع انثانث b c b c انرابع b A c A cd انخامس A c A d مستىي انمعنى ت T2 T3 مستىي انمعنى ت جدول انمتىسطاث انت تحمم حروفا كب رة ضمن انعمىد انىاحذ )ب ن انمعامالث( وحروفا صغ رة ضمن انصف انىحذ )ب ن اال او( تختهف معنى ا ف ما ب نها. )P<0.01( : غ ر معنى. العدد والنسبة المئوية النواع البكتريا في المعامالت التجريبة المستخدم فيها الالكتوفيرين ومعاممة السيطرة. انمعامهت انمعامهت االون T1 LF 400 mg /L نىع انجرثىم ا sphingomonas paucimobilis Stenotrophomonas maltophilia انعذد )%( )%14.29( 2 )%21.43( 3 )%21.43( 3 )%42.86( 6 )%100( Klebsiella pneumonia Proteus mirabilis Cupriavidus pauculus Klebsiella pneumonia Proteus mirabilis Cupriavidus pauculus Escherichia hermannii Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus Salmonella cholerasuis Enterobacter cloacae Staphylococcus epidermidis انمعامهت انثان ت T2 LF 800 mg/l انمعامهت انثانثت T3 LF 1200 mg /L Control انعذد انكه ق مت مربع كا ( 2 χ(.)p<0.01( 1465

6 جدول. 3 تأثير المعاممة بالالكتوفيرين في مخففات السائل المنوي عمى العدد انمتىسط انخطأ انق اس )CUF/ml( a ab b ab REFERENCCES 1.Althouse G. C.and Lu K.G Bacteriospermia in extended porcine semen. Theriogenology Althouse G. C Sanitary procedures for the production of extended semen. Reprod. Domest. Anim Arnold R. R. J. E. Russell W. J. Champion and J. J. Gauthier Bactericidal activity of human lactoferrin: Influence of physical conditions and metabolic state of the target microorganism. Infect. Immun. 32: Arnold R. R. J. E. Russell W. J. Champion M. Brewer and J. J. Gauthier Bactericidal activity of human lactoferrin: Differentiation from the stasis of iron deprivation. Infect. Immun. 35: Arnold R. R. M. Brewer and J. J. Gauthier Bactericidal activity of human lactoferrin: Sensitivity of a variety of microorganisms. Infect. Immun. 28: Baker E. N. and H. M. Baker Molecular structure binding properties and dynamics of lactoferrin. Cell Mol. Life Sci. 62(22): Brock J.H The physiology of lactoferrin. Biochem. Cell Biol. 80:6. 8.Ellison R. T.3rd T. J. Giehl and F. M. LaForce Damage of the outer membrane of enteric gram-negative bacteria by lactoferrin and transferrin. Infect. Immun. 56: Erdei J. A. Forsgren and A. S. Naidu Lactoferrin binds to porins OmpF and OmpC in Escherichia coli. Infect. Immun. 62: Farnaud S. and R. W. Evans Lactoferrinamultifunctional protein with antimicrobial properties. Mol. Immunol. 40: Groves M. L Preparation of some iron-binding proteins and alpha-lactalbumin * 1466 انمعامهت انس طرة )Control( انمعامهت االون T1 LF 400 mg /ml انمعامهت انثان ت T2 LF 800 mg/ml انمعامهت انثانثت T3 LF 1200 mg /ml مستىي انمعنى ت انمتىسطاث انت تحمم حروف مختهفت ضمن انعمىد انىاحذ تختهف معنى ا ف ما ب نها..)P<0.05( * from bovine milk. Biochom. Biophys. Acta. 100: Hancock J.L Morphology of bull spermatozoa. Nature.157: Johanson B Isolation of an ironcontaining red protein from human milk. Acta Chem. Scand. 14: doi: / acta. chem. scand Legrand D. A. Pierce E. Elass M. Carpentier C. Mariller and J. Mazurier Lactoferrin structure and functions. Adv. Exp. Med. Biol. 606: Mann.T.1974.Ostatnieosiagniecia naukowe w dziedzinie biochemii nasieniaiukladurozrodczegomeskiego.zesz.nauk.ar Krakow. 16.Maxwell W. M. C.and Salamon S Liquid storage of ram semen a review. Reprod. Fertil. Dev OIE World Organization for Animal Health. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 6th Ed. 18.Oo T. Z. N. Cole L. Garthwaite M. D. Willcox and H. Zhu Evaluation of synergistic activity of bovine lactoferricin with antibiotics in corneal infection. J. Antimicrob. Chemother. 19.Pierce A. and D. Legrand Advances in lactoferrin research. Biochimie. 91: Russell LD Montag B Hunt W and Peterson RN Properties of boar sperm plasma membranes (PM): proteins released by washing and differential solubility in salts detergents and sensitivity to surface radiolabelling. Gamete Res; 11: Salamon S. and Maxwell W.M.C Storage of ram semen. Anim. Reprod. Sci Sorensen M. and S. P. L. Sorensen The proteins in whey. C.R. Trav. Lab. Carlsberg Ser. Chim. 23: Suzuki Y. A. V. Lopez and B. Lonnerdal Mammalian lactoferrin receptors:

7 Structure and function. Cell Mol. Life Sci. 62(22): Thibier M. and Guerin B Hygienic aspects of storage and use of semen for artificial insemination. Anim. Reprod. Sci Watson P.F and Anderson W.J Influence of butylated hydroxytoluene (BHT) on the viability of ram spermatozoa undergoing cod shock. J. Reprod. Fertile 69(1): WeinbergE.D Suppression of bacterial biofilm formation by iron limitation. Med. Hypotheses. 63: Yaniz J. L. Marco-Aguado M. A. Mateos J. A.and Santolaria P Bacterial contamination of ram semen antibiotic sensitivities and effects on sperm quality during storage at 15 C. Anim. Reprod. Sci. (122):